Μελέτη της επίδρασης των καλλιεργητικών πρακτικών
Καλλιεργητικές πρακτικές όπως το σωστό κλάδεμα που συμβάλει στο περιορισμό της υγρασίας στην κόμη των ελαιόδεντρων αλλά και η λιπαντική πολιτική επηρεάζουν την εκδήλωση της ασθένειας. Η επιτυχία των καλλιεργητικών πρακτικών εκφράζεται κυρίως με τη συγκέντρωση των θρεπτικών στοιχείων στα φύλλα (φυλλοδιαγνωστική).
Μελέτη της μολυσματικής ικανότητας τεσσάρων στελεχών
Σκοπός είναι να ανιχνευθεί η παρουσία του παθογόνου, να εκτιμηθεί το επίπεδο του πληθυσμού του και να επιλεγούν στελέχη για παραπέρα μελέτη. Σε κάθε ελαιώνα θα επιλεγούν 6 αντιπροσωπευτικά της επικρατούσας κατάστασης ελαιόδεντρα.
Σύνδεση του δείκτη ωριμότητας του ελαιοκάρπου της Κορωνέικης ποικιλίας
Τα τελευταία χρόνια η ασθένεια του γλοιοσπορίου, η οποία οφείλεται στον μύκητα Colletotrichum spp., έχει αναδειχθεί σε σημαντικό πρόβλημα για την ελαιοκαλλιέργεια. Στην παρούσα εργασία μελετήθηκε η συσχέτιση του Δείκτη Ωριμότητας (Maturity Index, MI) και της περιεκτικότητας σε νερό του ελαιόκαρπου
Θα επιλεγούν 50 ελαιώνες στις κύριες ελαιοκομικές ζώνες της Περιφέρειας Πελοποννήσου. Η κατανομή τους θα γίνει βάσει του όγκου παραγωγής κάθε ζώνης και αναλογικά για τις κύριες ελαιοπαραγωγικές ποικιλίες της Περιφέρειας Πελοποννήσου (Κορωνέικη, Μανάκι, Αθηνολία, Μαυρολιά, Μεγαρίτικη). Στη δειγματοληψία θα συμπεριληφθεί και η ποικιλία Νεμουτιάνα που καλλιεργείται στην περιοχή της Ολυμπίας και στα όρια της Αρκαδίας, η οποία τα τελευταία χρόνια παρουσιάζει ιδιαίτερο ενδιαφέρον λόγω του υψηλού επιπέδου φαινολικών ουσιών που παράγει και συνδέονται με ισχυρισμό υγείας. Έμφαση θα δοθεί στις περιοχές παραγωγής ελαιόλαδου ΠΟΠ (Καλαμάτα, Κροκεές Λακωνίας, Πετρίνα Λακωνίας, Φοινίκι Λακωνίας, Κρανίδι Αργολίδας, Λυγουριό Ασκληπείου Αργολίδας, Εξαιρετικό παρθένο ελαιόλαδο Τροιζηνία). Ταυτόχρονα θα συμπεριληφθεί και η ποικιλία Καλαμών για την παραγωγή επιτραπέζιων ελιών που εκτός από ΠΟΠ είναι και εμβληματική ποικιλία για την περιοχή. Θα επιλεγούν ελαιώνες με τρόπο ώστε στην ίδια περιοχή με παρόμοιες εδαφοκλιματικές συνθήκες, να εφαρμόζονται καλές και κακές καλλιεργητικές πρακτικές που αφορούν το κλάδεμα, τη θρέψη, την αντιμετώπιση του δάκου και την εφαρμογή μυκητοκτόνων. Σκοπός είναι να διερευνηθεί η επίδραση των καλλιεργητικών πρακτικών στο επίπεδο αλλά και τη σύνθεση του πληθυσμού του παθογόνου σε πραγματικές συνθήκες.
Σκοπός είναι να ανιχνευθεί η παρουσία του παθογόνου, να εκτιμηθεί το επίπεδο του πληθυσμού του και να επιλεγούν στελέχη για παραπέρα μελέτη. Σε κάθε ελαιώνα θα επιλεγούν 6 αντιπροσωπευτικά της επικρατούσας κατάστασης ελαιόδεντρα. Από τα ελαιόδεντρα αυτά θα ληφθεί φυτικό υλικό σε 4 στάδια, αυτά, της ανθοφορίας, της σκλήρυνσης του πυρήνα, της εμπορικής ωρίμανσης και του λήθαργου του δέντρου, με σειρά που θα καθορισθεί από την ημερομηνία έναρξης του έργου. Στο στάδιο της ανθοφορίας θα συλλεγούν ανθοταξίες, στο στάδιο της σκλήρυνσης του πυρήνα και εμπορικής ωρίμανσης καρποί, και στο στάδιο του λήθαργου φύλλα, διετείς βλαστοί και αν υπάρχουν μουμιοποιημένοι καρποί από τα δέντρο ή το έδαφος. Στα φύλλα που θα συλλεγούν κατά την περίοδο του λήθαργου, θα πραγματοποιηθεί μέτρηση των θρεπτικών στοιχείων (φυλλοδιαγνωστική) για να εκτιμηθεί η θρεπτική κατάσταση των δέντρων και η συσχέτιση της συγκέντρωσής τους με τον πληθυσμό του παθογόνου. Από τους φυτικούς ιστούς θα γίνει απομόνωση του παθογόνου σε εκλεκτικό θρεπτικό υλικό (PDA με chloramphenicol), δημιουργία καθαρών στελεχών (single spore) και ταξινόμησή τους σε είδη και φαινοτύπους με τεχνική ITS (Internal Transcribed Spacer). Από τα στοιχεία θα προκύψει το επίπεδο και η γενετική σύνθεση του πληθυσμού του παθογόνου στις διάφορες περιοχές και για τις διαφορετικές ποικιλίες ελιάς αλλά και συσχετίσεις με τις συνήθεις καλλιεργητικές πρακτικές των περιοχών.
Από τις απομονώσεις κάθε περιοχής και κάθε ποικιλίας ελιάς, θα επιλεγούν στελέχη, αναλογικά των φαινοτύπων, για τη μελέτη της προσαρμοστικότητάς τους μέσω του ρυθμού μυκητιακής ανάπτυξης και της σποροπαραγωγής in vitro σε συνθετικό θρεπτικό υλικό καλλιέργειας. Συγκεκριμένα, καρποί ελιάς στο στάδιο της εμπορικής ωρίμανσης θα εμβολιασθούν με αιώρημα κονιδίων του προς μελέτη στελέχους, θα δημιουργηθούν μικροτραυματισμοί του φλοιού για τη διευκόλυνση εισόδου του μύκητα, θα επωασθούν σε κατάλληλες συνθήκες και ο βαθμός προσβολής θα εκτιμηθεί στην κλίμακα 1-5 σύμφωνα με τη διεθνή βιβλιογραφία. Βάσει του επιπέδου του πληθυσμού του παθογόνου, την προσαρμοστικότητα και την παθογόνο δύναμη των στελεχών θα εκτιμηθεί η συνολική δυναμική του παθογόνου στις διάφορες ζώνες ελαιοκαλλιέργειας.
Αρχικά θα εξαχθεί το γενετικό υλικό όλων των στελεχών του γλοιοσπορίου που θα απομονωθούν και θα αποτελέσει τη βάση ταυτοποίησης του κάθε στελέχους ώστε να διαπιστωθεί η ταξινομική σύσταση του πληθυσμού. Οι γενωμικές περιοχές που θα χρησιμοποιηθούν είναι η ITS (Internal Transcribed Spacer) που περιλαμβάνει τους ITS1, ITS2 και 5.8S γενετικούς τόπους, η γενωμική περιοχή του γονιδίου της β-τομπουλίνης και η πλούσια σε γενετική παραλλακτικότητα του γονιδίου της GAPDH (αφυδρογονάση της 3-φωσφορικής γλυκεραλδεΰδης). H προσέγγιση αυτή θα ξεκαθαρίσει την ταξινομική κατάταξη του κάθε στελέχους και θα επιτρέψει την χαρτογράφηση των ειδών του Colletotrichum spp. στις υπό μελέτη περιοχές και ποικιλίες ελιάς.
